Analytik: Quali. und Quant. Analyse
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Analytik: Quali. und Quant. Analyse Nasschemische Nachweise (z.B. Trennungsgang) und Gehaltsbestimmungen per Titration, Gravimetrie, Konduktometrie, etc.

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Alt 16.11.2014, 18:46   #1   Druckbare Version zeigen
LiBeBCNOFNe  
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Beiträge: 5
Michaelis-Menten-Kinetik via Photometrie //Enzymaktivität

Guten Abend,

Für mein Biochemie-Praktikum müssen wir den Km-Wert für NAD+ und Ethanol bestimmen.
Folgender Aufbau:
6 Lösungen von jeweils:
-1,2 ml Pufferlösung
-0,05ml Ethanol
werden mit unterschiedlichen Konzentrationen von NAD+ versehen.
Nach Zugabe von ADH wird die Enzymaktivität[Extinktion]über 2 Minuten hinweg gemessen. Hierbei wird die Extinktion von NADH gemessen, welches ja bei der ALkoholdehydrogenase ensteht.

Analog dazu werden in gleicher Vorgehensweise bei konstanter NAD+ Stoffmenge unterschiedliche Volumina Ethanol vermessen.(ebenfalls über 2 min)

Nun dachte ich man könne in aller Ruhe Km ablesen, da der Km ja der Konzentration bei Vmax/2 enspricht.
Online und in der Literatur wird die Enzymaktivität(Vmax) ja gegen die Substratkonzentration aufgetragen, das liese ein Ablesen von Km zu.

Das Problem ist nur das ich bei feststehenden Konzentrationen die Extinktion gegen die Zeit messe. Ich könnte quasi eine Aussage fällen über die Zeit an der Vmax bzw Vmax/2 eintritt, aber was hilft mir das?

Liebe Grüße
und danke vorweg!

Hier ein Ausschnitt aus der Vorschrift :
Leider schneidet mir die Website immer den Anfang von jedem Link weg sobald ich ihn mal eingefügt hab, nach 15 min probieren hab ich das mit der Vorschrift aufgegeben. Wenn jemand weiß wie man das umgeht würde ich mich sehr freuen.insofern die Vorschrift überhaupt von nöten ist

Geändert von LiBeBCNOFNe (16.11.2014 um 19:14 Uhr)
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Alt 16.11.2014, 19:25   #2   Druckbare Version zeigen
LiBeBCNOFNe  
Mitglied
Themenersteller
Beiträge: 5
AW: Michaelis-Menten-Kinetik via Photometrie //Enzymaktivität

Durch das ganze Rumprobieren beim Hochladen der Versuchsvorschrift kann ich jetzt scheinbar keine Änderungen mehr am ursprünglichen Thread machen.
Ich wollte nur anmerken :
Die Rückreaktion zu NAD+ wird durch Semicarbazid im Puffer verhindert.
LiBeBCNOFNe ist offline   Mit Zitat antworten
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Stichworte
alkoholdehydrogenase, enzyme, menten, nad+, photometrie

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